自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器,终将吞食物在溶酶体内降解的过程,自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构,内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物,损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、
病毒和细菌等。单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC是一种荧光色素,是嗜酸性染色剂,通常被于检测自噬体形成的特异性标记染色剂,其检测激发滤光片波长355nm ,阻断滤光片波长512nm。Leagene MDC染色液适用于培养细胞的自噬染色,可与EB合用双染。
透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失,核染色质固缩、边.集,常呈新月形,核膜皱褶,胞质紧实,细胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和调亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。
结果评判:调亡细胞体积变小,细胞质浓缩。CD117(c-kit)阳性细胞和二者都阳性细胞所占百分比前后比较差异无显著性(P>。调亡I期( pro-apoptosis nuclei)的细胞核内染色质高度盘绕,出现许多称为气穴现象( cavitati)的空泡结构; IIa 期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化;细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生调亡小体。
Q:如何避免中沉淀物的出现?
A:首先要注意正确的解冻步骤,而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加,使用中应该尽量避免:
(1)热灭活;
(2)在 37℃ 下培养;
(3)反复冻融;
(4)γ 射线照射;
(5)长期储存在 2-8℃;
(6)在室温下放置时间过长
Q:如何去除中的沉淀?
A:如想去除这些絮状沉淀物,可以将分装到无菌离心管中,以 400g 离心,上清液即可直接加入到培养基 内一起过滤。
注意:不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物,因为这可能阻塞滤膜。
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