再此背景下,细胞存储银行、细胞库等很多生物公司和相关研究机构变得火热起来,但冻存细胞是个“技术活”,选择合适的降温仪器,才能保证珍贵的有高质量的复苏活性。免液氮的程序降温仪出现了。这款仪器针对于传统的液氮程序降温仪做了很大的技术革新,采用先进的斯特林循环引擎(Stirling Cycle Engine),可提供的、重现性的生物制冷效果。
快速降温保存,即玻璃化方法就是用高浓度的冷冻稀释液,以极快的速率降温,使溶液内没有足够的时间形成冰晶核就直接转变成无形态的玻璃样固体的过程。此方法的优点是不用的程序控制降温仪,操作简便、快速,减轻损伤,但是由于在降温过程中需要加入大量的冷冻保护剂,高达40-60%v/v,这些冷冻保护剂往往存在一定毒性会内部细胞,同时由于玻璃化过程中为了确保整个生物样品的内部和外部均能实现快速降温,需要减少样品的尺寸、以及增加和外界超低温环境(比如液氮)的接触面积。因此这种暂时只适用于小尺寸、小计量生物样品的保存,仅有ul单位。所以,目前大家还是通常采取慢速降温进行低温保存。系统仅需要少量的液氮。无需使用液氮钢瓶,也完全不涉及酒精等其他易挥发或可 燃的液体。
系统每小时消耗的液氮量小于1升,电量的消耗少于60瓦。
操作使用简单,设置后几乎不需要监控。
紧凑结构设计,体积小,重量轻,便于野外使用。
系统的整体设计使得完全不产生振动或噪音。
技术参数:CL-5500控制器可预置8个程序(标准配置),具有电池组和电池充电器装置,可用主电源、内置电池或外部12V电源供电。非常适用于野外工作,或主电源不稳定的地方。
控温范围:+20°C至-43°C之间
温度显示:数字式液晶显示,分辨率0.1°C
内置程序:8个
温控器使用温度:+40°C与0°C之间
温控器尺寸:118×192×220mm
细胞冷冻保存,1. 材料:生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO (Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、0. 4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、细胞冻存程序仪(也称为程序降温仪。冷冻保存方法:(1)传统方法: 冷存管置于4 ℃10分钟--->-20 ℃30分钟--->-80 ℃ 16~18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。-20 ℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量,亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。(2)程序降温:利用已设定程序的等速细胞冻存程序仪以-1~-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃,再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
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